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大鼠5-羥色胺受體4 （ELISA）試劑盒
| 規(guī)格：96T/48T 產品用途：僅供科研檢測，不得用于臨床 特色服務： 免費代測 檢測樣本種類：血清，血漿，尿液，組織勻漿，細胞上清液，灌洗液，糞便等樣本 廣州奧瑞達生物供應種屬有：大鼠，小鼠，豚鼠，兔，犬，猴，豬牛羊，雞鴨鵝，植物，魚，昆蟲ELISA試劑盒等 試驗原理： 是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。 試劑盒內容及其配制 自備材料 1）蒸餾水。 2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3）振蕩器及磁力攪拌器等。 安全性 1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。 2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。 3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。 操作注意事項 1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。 2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。 3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。 4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。 5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。 7）底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。 8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。 9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 樣品收集、處理及保存方法 1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液 5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 試劑的準備 1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。 2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。 操作步驟 1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。 2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。 3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。 4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。 5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。 6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。 7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。 8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。 9）在450nm波長處測定各孔的OD值。 |
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